簡(jiǎn)要描述:
NADP蘋果酸脫氫酶(NADPMDH)測(cè)試盒廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,線粒體中MDH是TCA循環(huán)的關(guān)鍵酶之一,催化蘋果酸形成草酰乙酸;相反,胞漿中MDH催化草酰乙酸形成蘋果酸。草酰乙酸是重要的中間產(chǎn)物, 連接多條重要的代謝途徑。
更新時(shí)間:2024-09-02;廠商性質(zhì):經(jīng)銷商;覽量:1227
商品詳情:
NADP蘋果酸脫氫酶(NADPMDH)測(cè)試盒測(cè)定意義:
MDH (EC 1.1.1.37)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,線粒體中MDH是TCA循環(huán)的關(guān)鍵酶之一,催化蘋果酸形成草酰乙酸;相反,胞漿中MDH催化草酰乙酸形成蘋果酸。草酰乙酸是重要的中間產(chǎn)物, 連接多條重要的代謝途徑。因此,MDH在細(xì)胞多種生理活動(dòng)中扮演著重要的角色,包括線粒體的能量代謝、 蘋果酸-天冬氨酸穿梭系統(tǒng)、活性氧代謝和抗病性等。根據(jù)不同的輔酶特異性,MDH分為NAD-依賴的MDH和NADP-依賴的MDH, NADP-MDH主要存在于真核細(xì)胞中。
貨號(hào) | 規(guī)格 | 檢測(cè)方法 |
YSH3229 | 100管/96樣 | 微量法 |
YSH3229-1 | 50管/48樣 | 紫外分光光度法 |
測(cè)定原理:
NADP-MDH催化NADPH還原草酰乙酸生成蘋果酸,導(dǎo)致340nm處光吸收下降。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。
樣品中AA提取:
1.按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進(jìn)行室溫勻漿,然后轉(zhuǎn)移到1.5 mL EP 管中,蓋緊后(防止水分散失)置于沸水浴提取15 min;自來水冷卻后,8000g,,4℃離心10min,上清液置冰上待測(cè)。
2.細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL試劑一),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g,4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
3.血清等液體:直接檢測(cè)。
計(jì)算公式如下:
1、血清(漿)LAP活力的計(jì)算:
單位的定義:每mL血清(漿)每分鐘生成1 nmol的對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。
LAP(nmol/min/mL)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷V樣÷T=205.8×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中LAP活力的計(jì)算:
(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol 對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。
LAP(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=205.8×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計(jì)算:
單位的定義:每g組織每分鐘生成1 nmol 對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。
LAP(nmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=205.8×ΔA÷W
(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:
單位的定義:每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成1 nmol 對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。
LAP(nmol/min /104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(2000×V樣÷V樣總) ÷T=0.103×ΔA
V反總:反應(yīng)體系總體積,2×10-4 L;ε:對(duì)硝基苯胺摩爾消光系數(shù),9.72×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.05 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,2 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;2000:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),2000萬。
注意事項(xiàng):
1. 試劑盒中試劑三、試劑四和標(biāo)準(zhǔn)品均需臨用前配制,且避光保存,配制好未使用完的4℃保存且3天內(nèi)使用完畢。
2. 為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,需先取1-2個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn),如果測(cè)定的吸光值過高(高于2.5),用蒸餾水稀釋后再測(cè)定。
3. 與茚三酮反應(yīng)在570nm處無吸收峰,因此,570nm處測(cè)定結(jié)果不含這兩種氨基酸的量。
4.檢出限為100μmol/L。
過氧化酶7ELISA試劑盒 GPX7免費(fèi)代測(cè)試劑
過氧化酶5ELISA試劑盒 GPX5免費(fèi)代測(cè)試劑
過氧化酶4ELISA試劑盒 GPX4免費(fèi)代測(cè)試劑
S轉(zhuǎn)移酶μ2ELISA試劑盒 GSTμ2免費(fèi)代測(cè)試劑
S轉(zhuǎn)移酶κ1ELISA試劑盒 GSTκ1免費(fèi)代測(cè)試劑
S轉(zhuǎn)移酶α5ELISA試劑盒 GSTα5免費(fèi)代測(cè)試劑
S轉(zhuǎn)移酶α2ELISA試劑盒 GSTα2免費(fèi)代測(cè)試劑
谷丙轉(zhuǎn)氨酶2ELISA試劑盒 ALT2免費(fèi)代測(cè)試劑
酰肽環(huán)轉(zhuǎn)移酶ELISA試劑盒 QPCT免費(fèi)代測(cè)試劑
果糖-6-磷轉(zhuǎn)氨酶2ELISA試劑盒 GFPT2免費(fèi)代測(cè)試劑
脫羧酶樣蛋白1ELISA試劑盒 GADL1免費(fèi)代測(cè)試劑
脫氫酶2ELISA試劑盒 GLUD2免費(fèi)代測(cè)試劑
受體相互作用蛋白1ELISA試劑盒 GRIP1免費(fèi)代測(cè)試劑
豐富蛋白ELISA試劑盒 GRP免費(fèi)代測(cè)試劑
谷氨氨肽酶ELISA試劑盒 GluAP免費(fèi)代測(cè)試劑
NADP蘋果酸脫氫酶(NADPMDH)測(cè)試盒碳酐酶(CA)測(cè)試盒/微量法100管/96樣
糖化酶(Glucoamylase)測(cè)試盒/分光光度法50管/24樣
糖化酶(Glucoamylase)測(cè)試盒/微量法100T/48S
糖化血紅蛋白(GHb)測(cè)試盒/比色法15管/14樣
糖化血清蛋白(GSP)測(cè)試盒/果糖胺法25管/24樣
糖化血清蛋白(GSP)測(cè)試盒/果糖胺法50管/48樣
糖化血清蛋白(GSP)測(cè)試盒/微板法96T
糖原含量測(cè)試盒/分光光度法50管/48樣
糖原含量測(cè)試盒/微量法100管/96樣